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解讀鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的制備方法

 更新時(shí)間:2023-03-08    點(diǎn)擊量:482
  黃曲霉毒素在自然界分布的黃曲霉中,約有20%的菌株能產(chǎn)生黃曲霉毒素。其中花生、玉米、黃豆及棉籽等作物與其副產(chǎn)品易感染黃曲霉毒素,含黃曲霉毒素量較多,食入后在動(dòng)物體內(nèi)主要存在于如肝臟、尿與糞便中。黃曲霉毒素是一種肝臟毒素,能引起肝細(xì)胞變質(zhì)、壞死、出血;目前,黃曲霉毒素的酶聯(lián)免疫法,免疫膠體金法等檢測(cè)方法均需要黃曲霉毒素抗原抗體。
 
  黃曲霉毒素B1(AFB1)是具有強(qiáng)致癌性的極毒物質(zhì)。在濕熱條件下,花生、玉米、混合飼料等糧油作物霉變后AFB1的污染頻率較高,是對(duì)人類和畜牧危害最大的真菌毒素。該法屬于目測(cè)半定量,檢測(cè)精度低,而且操作復(fù)雜,需要使用標(biāo)準(zhǔn)品。
 
  鼠抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的制備方法:
 
  (1)黃曲霉毒素半抗原合成
 
  20-100mg黃曲霉毒素溶于丙酮中,10%硫酸中,于60℃攪拌反應(yīng),3h后,蒸干丙酮,洗滌4次,蒸干后得到黃曲霉毒素半抗原。
 
  (2)黃曲霉毒素全抗原(人工抗原、抗原、酶標(biāo)抗原)合成
 
  將黃曲霉毒素半抗原與牛血清白蛋白偶聯(lián)得到免疫抗原。
 
  取60mg牛血清白蛋白溶于9.5mlPBS(0.01mol/L,pH5.0)溶液中,加入50微升室溫?cái)嚢?h,用0.01mol/LPBS透析3天,每天換3次透析液,得到黃曲霉毒素與牛血清白蛋白的免疫抗原。
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